Perpustakaan Nasional RI menyelenggarakan kegiatan layanan perpustakaan dan informasi bagi masyarakat dan institusi. Layanan jasa perpustakaan dan informasi diselenggarakan dengan mendayagunakan koleksi Perpustakaan Nasional dan sumber informasi lain.

Sistem layanan yang diterapkan Perpustakaan Nasional adalah akses tertutup, selain petugas, tidak dibenarkan memasuki ruang penyimpanan koleksi. Bahan pustaka koleksi Perpustakaan Nasional hanya boleh dipergunakan di ruang baca, pengguna tidak diijinkan membawa koleksi ke luar ruang baca. Perpustakaan Nasional RI tidak menyelenggarakan layanan peminjaman koleksi.

Perpustakaan Nasional RI melayani pertanyaan atau permintaan informasi tentang berbagai subjek, bimbingan penelusuran literatur dari berbagai sumber terkait dengan penelitian ilmiah, meneruskan dan menyalurkan pertanyaan atau permintaan informasi yang tidak tersedia di Perpustakaan Nasional RI ke lembaga lain di dalam dan luar negeri, pembuatan kliping berita dan artikel dari surat kabar serta majalah koleksi sendiri, melayani permintaan alih media dan reproduksi bahan pustaka tercetak ke dalam format digital, fotografi, fotokopi, mikrofilm dan mikrofis dengan pertimbangan utama kondisi fisik bahan pustaka dan hak cipta, melayani pembuatan indeks beranotasi dari artikel surat kabar dan majalah terbitan sebelum Perang Dunia II sampai terbitan terbaru dengan topik-topik yang diinginkan pengguna jasa. Serta melayani permintaan alih aksara naskah nusantara dan koleksi langka dari aksara daerah ke aksara Latin dan alih bahasa dari bahasa daerah ke bahasa Indonesia.